Hipotermiczne przechowywanie nasienia knura może pozwolić na zachowanie nasienia bez antybiotyków, ale jest ograniczone ze względu na wrażliwość plemników knura na zimno. Postęp w tej dziedzinie wymaga wrażliwych narzędzi do wykrywania przeziębień. W związku z tym oceniono wieloparametrowe panele cytometrii przepływowej, aby ustalić, czy są one użytecznymi narzędziami do identyfikacji subletalnych uszkodzeń funkcji plemników na poziomie pojedynczej komórki, uwzględniając tym samym wysoką wewnętrzną niejednorodność plemników w próbce. Pierwszy panel fluorochromowy składał się z Hoechst 33342 do identyfikacji zdarzeń zawierających DNA, Yo-Pro 1 do wykrywania żywotności, merocyjaniny 540 do opisywania płynności błony oraz PNA-Alexa Fluor 647 do identyfikacji integralności akrosomicznej. Drugi panel fluorochromowy składał się z SiR700-DNA do identyfikacji zdarzeń zawierających DNA, JC-1 do scharakteryzowania mitochondrialnego potencjału przezbłonowego (MMP) oraz Calbryte 630 do oceny wewnątrzkomórkowego poziomu wapnia.
Rozszerzone nasienie knura przechowywano w temperaturze 17°C (kontrola) lub 5°C (schłodzone). Wykazano, że schładzanie zwiększyło płynność błony w żywej populacji plemników (z ujemnym wynikiem Yo-Pro 1) po 24 godzinach (p < 0,05). Po 144 godzinie populacja żywych, nienaruszonych akrosomicznie plemników o niskiej płynności błony była podobna dla obu temperatur przechowywania. Ponadto schładzanie zmniejszyło główną populację plemników z wysokim MMP, średnią fluorescencją dla monomeru JC-1 i niskim poziomem wapnia wewnątrzkomórkowego (p < 0,05). Jednak po kapacytacji plemników in vitro populacja ta nie różniła się między dwiema temperaturami przechowywania.
Przykładowa wizualizacja danych obliczeniowych na mapach stochastycznych osadzania sąsiadów z rozkładem t (t-SNE) i ruchomych wykresach radarowych ujawniła podobne subpopulacje zidentyfikowane za pomocą trójwymiarowych skumulowanych wykresów słupkowych. Podsumowując, plemniki, które przeżyły początkowy uraz polegający na wyziębieniu, wytrzymują długotrwałe przechowywanie i reagują w podobny sposób na warunki kapacytacji, jak plemniki przechowywane konwencjonalnie w temperaturze 17 °C. Wielobarwna cytometria przepływowa jest cennym narzędziem do wykrywania zmian funkcji komórek wywołanych wychłodzeniem w subpopulacjach plemników.
Sondowanie nanoelektroporacji i ponowne zamykanie błony komórkowej przez wnikanie jonów Ca2+ i Ba2+.
Głównym efektem biologicznym nanosekundowego pulsującego pola elektrycznego (nsPEF) jest trwała permeabilizacja błony komórkowej, którą często przypisuje się tworzeniu porów o rozmiarach nanometrowych. Takie pory mogą być zbyt małe do wykrycia przez wychwyt barwników fluorescencyjnych. Zbadaliśmy, czy jony Ca 2+ , Cd 2+ , Zn 2+ i Ba 2+ mogą być użyte jako markery nanoporacji. Obrazowanie poklatkowe przeprowadzono w komórkach CHO, BPAE i HEK obciążonych barwnikami Fluo-4, Calbryte lub Fluo-8. Ca 2+ i Ba 2+ nie zmieniły fluorescencji w nienaruszonych komórkach , natomiast ich wejście po nsPEF zwiększyło fluorescencję w ciągu <1 ms.
Calbryte 520 AM
Próg dla jednego impulsu 300 ns wynosił 1,5-2 kV/cm, znacznie niższy niż >7 kV/cm dla tworzenia większych porów, które dopuszczały do wnętrza barwnika YO-PRO-1, TO-PRO-3 lub propidium. komórki. Wejście Ba 2+ spowodowało stopniowy wzrost emisji, która osiągnęła stabilny poziom w ciągu 2 min lub, przy bardziej intensywnym nsPEF, stale rosła przez co najmniej 30 min. Wejście Ca 2+ mogło wywołać uwalnianie wapnia indukowane wapniem (CICR), a następnie usunięcie Ca 2+ z cytozolu, co znacząco wpłynęło na przebieg czasowy, polaryzację, amplitudę i zależność zmiany fluorescencji od dawki. Zarówno Ca 2+ , jak i Ba 2+ okazały się być czułymi markerami nanoporacji, przy czym Ba 2+ jest bardziej niezawodny w monitorowaniu uszkodzeń membrany i ponownym uszczelnianiu.
Ocena wpływu kalikuliny A na tworzenie ognisk γH2AX/53BP1 i apoptozę w ludzkich limfocytach krwi pępowinowej
Inhibitor defosforylacji, kalikulina A ( cal A), hamuje zanikanie wywołanych promieniowaniem ognisk naprawy DNA γH2AX w ludzkich limfocytach . Jednak inne badania wykazały brak zmian w kinetyce indukcji i utraty ogniska γH2AX w napromieniowanych komórkach. Chociaż apoptoza może współgrać z kinetyką tworzenia się ognisk, nie obserwowano jej w napromieniowanych komórkach wraz z ogniskami naprawy DNA. Tak więc, aby potwierdzić wiarygodne wyjaśnienia znaczącej zmienności wyników tych badań, oceniliśmy wpływ cal A (1 i 10 nM) na ogniska naprawy DNA γH2AX/53BP1 i apoptozę napromieniowanych (1, 5, 10 i 100 cGy) ludzka pępowina _limfocyty krwi (UCBL) przy użyciu, odpowiednio, automatycznej mikroskopii fluorescencyjnej i testu aneksyny V-FITC/jodku propidyny/barwienia γH2AX.
Nie zaobserwowano wpływu cal A na γH2AX i kolokalizowane ogniska γH2AX/53BP1 indukowane niskimi dawkami (≤10 cGy) promieni γ. Co więcej, traktowanie 10 nM cal A zmniejszyło liczbę wszystkich typów ognisk naprawy DNA indukowanych przez napromieniowanie 100 cGy. 10 nM cal Leczenie indukowało apoptozę już po 2 godzinach leczenia, niezależnie od dostarczonej dawki. Apoptozę wykryto również w UCBL leczonych niższym stężeniem kali A, 1 nM, przy dłuższej inkubacji komórek, 20 i 44 godz. Nasze dane sugerują, że apoptoza wywołana przez cal A w UCBL może być przyczyną niepowodzenia cal A w celu utrzymania wywołanych promieniowaniem ognisk γH2AX. Wszystkie markery molekularne DSB użyte w tym badaniu reagowały liniowo na napromienianie małą dawką. Dlatego ich połączenie może stanowić silne narzędzie biodozymetrii do szacowania odpowiedzi na promieniowanie na niskie dawki. Ocena kolokalizowanego γH2AX /53BP1 poprawiła próg wykrywania niskich dawek.
LOKALIZOWANIE STOŻKOWYCH PRZECIĘĆ CYTOZYNY ZA POMOCĄ EKSPERYMENTÓW LASEROWYCH I OBLICZEŃ AB INITIO.
Mechanizm rozpadu wzbudzonej cytozyny S0 → S1 (Cyt) oraz efekt substytucji badano łącząc spektroskopię z chłodzeniem strumieniowym (rezonansowa jonizacja dwóch fotonów ns (R2PI) i pomiary czasu życia ps) z obliczeniami CASPT2//CASSCF dla ośmiu pochodnych. Dla Cyt i pięciu pochodnych podstawionych w N1, C5 i C6, szybka wewnętrzna konwersja zachodzi przy 250 – 1200 cm-1 powyżej pasm 00. Załamanie w widmach koreluje z obliczonymi barierami w kierunku CI „skrętu C5-C6”, co jednoznacznie ustala mechanizm zaniku przy niskich energiach drgań stanu S1.
Bariery zwiększają się wraz z podstawnikami, które stabilizują przesunięcia ładunku przy C4, C5 i C6 po wzbudzeniu (1ππ∗). Widma R2PI pochodnych 5,6-trimetylenoCyt (TMCyt) i 1-metylo-TMCyt (1M-TMCyt), rozpadających się wzdłuż współrzędnej N3 poza płaszczyzną, rozciągają się do +3500 i +4500 cm-1 .
NOWE SULFONYLOWE CHROMEN-4-ONY (CHW09) PREFERENCYJNIE ZABIJAJĄ KOMÓRKI RAKA JAMY USTNEJ WYKAZUJĄCE APOPTOZĘ, STRES OKSYDACYJNY I USZKODZENIA DNA.
Kilka funkcjonalizowanych chromonów, kluczowych składników naturalnie występujących utlenionych heterocykli, ma działanie przeciwnowotworowe, ale ich związki sulfonowe są rzadko badane. W tym badaniu zainstalowaliśmy podstawnik sulfonylowy do szkieletu chromen-4-onu i zsyntetyzowaliśmy CHW09, aby ocenić jego działanie przeciwnowotworowe jamy ustnej pod względem żywotności komórek, cyklu komórkowego, apoptozy, stresu oksydacyjnego i uszkodzeń DNA. W teście żywotności komórek CHW09 preferencyjnie zabija dwie komórki raka jamy ustnej (Ca9-22 i CAL 27), mniej wpływając na normalne komórki jamy ustnej (HGF-1). Chociaż CHW09 nie zmienia znacząco dystrybucji cyklu komórkowego, CHW09 indukuje apoptozę potwierdzoną cytometrią przepływową dla aneksyny V i metodą western blotting dla rozszczepionej polimerazy poli(ADP-rybozy) (PARP) i kaspaz 3/8/9.
Calbryte™ 520 AM |
|||
| 20650 | AAT Bioquest | 2x50 ug | 158.4 EUR |
Calbryte™ 520 AM |
|||
| 20651 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 367.2 EUR |
Calbryte™ 520 AM |
|||
| 20653 | AAT Bioquest | 1 mg | 471.6 EUR |
Calbryte™-520L AM |
|||
| 20640 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 367.2 EUR |
Calbryte™-520XL AM |
|||
| 20646 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 367.2 EUR |
Calbryte™ 630 AM |
|||
| 20720 | AAT Bioquest | 2x50 ug | 262.8 EUR |
Calbryte™ 630 AM |
|||
| 20721 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 471.6 EUR |
Calbryte™ 630 AM |
|||
| 20722 | AAT Bioquest | 1 mg | 784.8 EUR |
Calbryte™ 520, potassium salt |
|||
| 20656 | AAT Bioquest | 2x50 ug | 262.8 EUR |
Calbryte™ 520, potassium salt |
|||
| 20658 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 471.6 EUR |
Cal-520®, AM |
|||
| 21130 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 262.8 EUR |
Cal-520®, AM |
|||
| 21131 | AAT Bioquest | 1 mg | 367.2 EUR |
Mag-520™ AM |
|||
| 20406 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 334 EUR |
Metal Fluor™ Zn-520, AM |
|||
| 21263 | AAT Bioquest | 1 mg | 262.8 EUR |
Screen Quest™ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36317 | AAT Bioquest | 1 Plate | 262.8 EUR |
Screen Quest™ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36318 | AAT Bioquest | 10 Plates | 784.8 EUR |
Screen Quest™ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36319 | AAT Bioquest | 100 Plates | 5227.2 EUR |
Calbryte™-520XL azide |
|||
| 20643 | AAT Bioquest | 1 mg | 576 EUR |
Calbryte™-520XL-Dextran |
|||
| 20648 | AAT Bioquest | 1 mg | 367.2 EUR |
NAADP-AM |
|||
| 21000 | AAT Bioquest | 1 mg | 1051.2 EUR |
BCECF, AM |
|||
| 21202 | AAT Bioquest | 1 mg | 211.2 EUR |
cAMP AM |
|||
| 20300 | AAT Bioquest | 1 mg | 60 EUR |
NAADP-AM |
|||
| 20997 | AAT Bioquest | 2X50 ug | 367.2 EUR |
NAADP-AM |
|||
| 20998 | AAT Bioquest | 250 ug | 471.6 EUR |
AM resin |
|||
| 20-abx095149 | Abbexa |
|
|
AM 114 |
|||
| A8163-10 | ApexBio | 10 mg | 142.8 EUR |
AM 114 |
|||
| A8163-25 | ApexBio | 25 mg | 226.8 EUR |
AM 114 |
|||
| A8163-5.1 | ApexBio | 10 mM (in 1mL DMSO) | 129.6 EUR |
AM 114 |
|||
| A8163-50 | ApexBio | 50 mg | 338.4 EUR |
AM 114 |
|||
| A8163-S | ApexBio | Evaluation Sample | 97.2 EUR |
AM-251 |
|||
| B2718-25 | Biovision | 25 mg | 612 EUR |
AM-251 |
|||
| B2718-5 | Biovision | 5 mg | 199.2 EUR |
BAPTA-AM |
|||
| B4758-10 | ApexBio | 10 mg | 153.6 EUR |
BAPTA-AM |
|||
| B4758-5.1 | ApexBio | 10 mM (in 1mL DMSO) | 170.4 EUR |
BAPTA-AM |
|||
| B4758-50 | ApexBio | 50 mg | 390 EUR |
BCECF-AM |
|||
| B5370-1 | ApexBio | 1 mg | 192 EUR |
BCECF-AM |
|||
| B5370-25 | ApexBio | 25 mg | 2533.2 EUR |
BCECF-AM |
|||
| B5370-5 | ApexBio | 5 mg | 654 EUR |
AM 281 |
|||
| B6603-10 | ApexBio | 10 mg | 234 EUR |
AM 281 |
|||
| B6603-5 | ApexBio | 5 mg | 150 EUR |
AM 281 |
|||
| B6603-50 | ApexBio | 50 mg | 762 EUR |
AM 404 |
|||
| B6604-100 | ApexBio | 100 mg | 502.8 EUR |
AM 404 |
|||
| B6604-50 | ApexBio | 50 mg | 313.2 EUR |
AM 1172 |
|||
| B7392-10 | ApexBio | 10 mg | 282 EUR |
AM 1172 |
|||
| B7392-100 | ApexBio | 100 mg | 1696.8 EUR |
AM 1172 |
|||
| B7392-5 | ApexBio | 5 mg | 176.4 EUR |
AM 1172 |
|||
| B7392-50 | ApexBio | 50 mg | 996 EUR |
SBFI-AM |
|||
| GK8201-1MG | Glentham Life Sciences | 1 mg | 753.6 EUR |
Calcein-AM |
|||
| HY-D0041 | MedChemExpress | 100ug | 176.4 EUR |
EGTA-AM |
|||
| HY-D0973 | MedChemExpress | 5mg | 704.4 EUR |
BCECF-AM |
|||
| HY-101883 | MedChemExpress | 1mg | 379.2 EUR |
AM-0902 |
|||
| HY-108329 | MedChemExpress | 100mg | 1383.6 EUR |
RT-AM |
|||
| HY-108715A | MedChemExpress | 1mg | 542.4 EUR |
AM-4668 |
|||
| HY-12585 | MedChemExpress | 5mg | 445.2 EUR |
AM-1638 |
|||
| HY-13467 | MedChemExpress | 5mg | 542.4 EUR |
AM 103 |
|||
| HY-14163 | MedChemExpress | 1mg | 2704.8 EUR |
Calcein-AM |
|||
| GT0291-1MG | Glentham Life Sciences | 1 mg | 409.2 EUR |
AM-2394 |
|||
| HY-100221 | MedChemExpress | 10mM/1mL | 259.2 EUR |
BAPTA-AM |
|||
| HY-100545 | MedChemExpress | 50mg | 523.2 EUR |
AM-2099 |
|||
| HY-100727 | MedChemExpress | 10mM/1mL | 433.2 EUR |
AM-679 |
|||
| B2521-1 | Biovision | each | 183.6 EUR |
AM-679 |
|||
| B2521-5 | Biovision | each | 516 EUR |
AM-095 |
|||
| 9581-25 | Biovision | each | 705.6 EUR |
AM-095 |
|||
| 9581-5 | Biovision | each | 222 EUR |
Calcein AM |
|||
| 1755-1000 | Biovision | each | 444 EUR |
Calcein AM |
|||
| 1755-250 | Biovision | each | 392.4 EUR |
Calcein AM |
|||
| 1755-50 | Biovision | each | 157.2 EUR |
BAPTA AM |
|||
| 2242-25 | Biovision | each | 314.4 EUR |
BAPTA AM |
|||
| 2242-5 | Biovision | each | 130.8 EUR |
Calbryte™-520L, potassium salt |
|||
| 20642 | AAT Bioquest | 10X50 ug | 367.2 EUR |
Calbryte™-520XL, potassium salt |
|||
| 20645 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 367.2 EUR |
Calbryte™ 590, potassium salt |
|||
| 20706 | AAT Bioquest | 5x50 ug | 367.2 EUR |
Calbryte™ 590, potassium salt |
|||
| 20707 | AAT Bioquest | 1 mg | 842.4 EUR |
Calbryte™ 630, potassium salt |
|||
| 20727 | AAT Bioquest | 5x50 ug | 367.2 EUR |
Ascomycin(FK 520) |
|||
| A3191-100 | ApexBio | 100 mg | 166.8 EUR |
Ascomycin(FK 520) |
|||
| A3191-5.1 | ApexBio | 10 mM (in 1mL DMSO) | 150 EUR |
Ascomycin(FK 520) |
|||
| A3191-50 | ApexBio | 50 mg | 142.8 EUR |
ARRY 520 trifluoroacetate |
|||
| A4458-10 | ApexBio | 10 mg | 393.6 EUR |
ARRY 520 trifluoroacetate |
|||
| A4458-25 | ApexBio | 25 mg | 790.8 EUR |
ARRY 520 trifluoroacetate |
|||
| A4458-5 | ApexBio | 5 mg | 247.2 EUR |
BAPTA, AM ester |
|||
| 50000-1 | Biotium | 20MG | 291.6 EUR |
BCECF, AM ester |
|||
| 51012 | Biotium | 1MG | 164.4 EUR |
Rhod-5N, AM |
|||
| 21070 | AAT Bioquest | 1 mg | 315.6 EUR |
Rhod-FF, AM |
|||
| 21077 | AAT Bioquest | 1 mg | 367.2 EUR |
Rhod-FF, AM |
|||
| 21078 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 262.8 EUR |
Fluo-2, AM |
|||
| 20494 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 211.2 EUR |
Fluo-2, AM |
|||
| 20495 | AAT Bioquest | 1 mg | 262.8 EUR |
Calcein AM, (20x50ug) |
|||
| 80011-3 | Biotium | 20ST | 290.4 EUR |
AM 92016 hydrochloride |
|||
| B6482-10 | ApexBio | 10 mg | 381.6 EUR |
Fura 2-AM |
|||
| GK3824-1MG | Glentham Life Sciences | 1 mg | 322.8 EUR |
Rhod-2 AM |
|||
| HY-D0989 | MedChemExpress | 1mg | 523.2 EUR |
Fluo-4 AM |
|||
| HY-101896 | MedChemExpress | 100ug | 655.2 EUR |
Fura-2 AM |
|||
| HY-101897 | MedChemExpress | 1mg | 489.6 EUR |
Indo-1 AM |
|||
| HY-101898 | MedChemExpress | 1mg | 439.2 EUR |
AM-92016 (hydrochloride) |
|||
| HY-101253 | MedChemExpress | 10mM/1mL | 211.2 EUR |
Poricoic acid AM |
|||
| TBW00284 | ChemNorm | 10mg | 1554 EUR |
Calcein AM 10x50ug |
|||
| 354216 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 304.38 EUR |
EDTA, AM ester |
|||
| 19010 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 109 EUR |
EDTA, AM ester |
|||
| 19011 | AAT Bioquest | 10 mg | 166 EUR |
AM-92016 Hydrochloride |
|||
| B2569-25 | Biovision | each | 757.2 EUR |
Te ekspresje sygnalizacji apoptozy są częściowo zmniejszane przez inhibitor apoptozy (Z-VAD-FMK) lub zmiatacz wolnych rodników (N-acetylocysteina). Ponadto CHW09 indukuje stres oksydacyjny potwierdzony cytometrią przepływową dla generacji reaktywnych form tlenu (ROS) i nadtlenku mitochondrialnego (MitoSOX) oraz tłumienia potencjału błony mitochondrialnej (MMP). CHW09 indukuje również uszkodzenie DNA potwierdzone przez cytometrię przepływową pod kątem wzrostu markera dwuniciowego przerwania DNA γH2AX i oksydacyjnego markera uszkodzenia DNA 8-okso-2′-deoksyguanozyny (8-oxodG). Dlatego nasz nowo zsyntetyzowany CHW09 indukuje apoptozę, stres oksydacyjny i uszkodzenia DNA, co może prowadzić do preferencyjnego zabijania komórek raka jamy ustnej w porównaniu z normalnymi komórkami jamy ustnej.
Dodaj komentarz