Hipotermiczne przechowywanie nasienia knura może pozwolić na zachowanie nasienia bez antybiotyków, ale jest ograniczone ze względu na wrażliwość plemników knura na zimno. Postęp w tej dziedzinie wymaga wrażliwych narzędzi do wykrywania przeziębień. W związku z tym oceniono wieloparametrowe panele cytometrii przepływowej, aby ustalić, czy są one użytecznymi narzędziami do identyfikacji subletalnych uszkodzeń funkcji plemników na poziomie pojedynczej komórki, uwzględniając tym samym wysoką wewnętrzną niejednorodność plemników w próbce. Pierwszy panel fluorochromowy składał się z Hoechst 33342 do identyfikacji zdarzeń zawierających DNA, Yo-Pro 1 do wykrywania żywotności, merocyjaniny 540 do opisywania płynności błony oraz PNA-Alexa Fluor 647 do identyfikacji integralności akrosomicznej. Drugi panel fluorochromowy składał się z SiR700-DNA do identyfikacji zdarzeń zawierających DNA, JC-1 do scharakteryzowania mitochondrialnego potencjału przezbłonowego (MMP) oraz Calbryte 630 do oceny wewnątrzkomórkowego poziomu wapnia.
Rozszerzone nasienie knura przechowywano w temperaturze 17°C (kontrola) lub 5°C (schłodzone). Wykazano, że schładzanie zwiększyło płynność błony w żywej populacji plemników (z ujemnym wynikiem Yo-Pro 1) po 24 godzinach (p < 0,05). Po 144 godzinie populacja żywych, nienaruszonych akrosomicznie plemników o niskiej płynności błony była podobna dla obu temperatur przechowywania. Ponadto schładzanie zmniejszyło główną populację plemników z wysokim MMP, średnią fluorescencją dla monomeru JC-1 i niskim poziomem wapnia wewnątrzkomórkowego (p < 0,05). Jednak po kapacytacji plemników in vitro populacja ta nie różniła się między dwiema temperaturami przechowywania.
Przykładowa wizualizacja danych obliczeniowych na mapach stochastycznych osadzania sąsiadów z rozkładem t (t-SNE) i ruchomych wykresach radarowych ujawniła podobne subpopulacje zidentyfikowane za pomocą trójwymiarowych skumulowanych wykresów słupkowych. Podsumowując, plemniki, które przeżyły początkowy uraz polegający na wyziębieniu, wytrzymują długotrwałe przechowywanie i reagują w podobny sposób na warunki kapacytacji, jak plemniki przechowywane konwencjonalnie w temperaturze 17 °C. Wielobarwna cytometria przepływowa jest cennym narzędziem do wykrywania zmian funkcji komórek wywołanych wychłodzeniem w subpopulacjach plemników.
Sondowanie nanoelektroporacji i ponowne zamykanie błony komórkowej przez wnikanie jonów Ca2+ i Ba2+.
Głównym efektem biologicznym nanosekundowego pulsującego pola elektrycznego (nsPEF) jest trwała permeabilizacja błony komórkowej, którą często przypisuje się tworzeniu porów o rozmiarach nanometrowych. Takie pory mogą być zbyt małe do wykrycia przez wychwyt barwników fluorescencyjnych. Zbadaliśmy, czy jony Ca 2+ , Cd 2+ , Zn 2+ i Ba 2+ mogą być użyte jako markery nanoporacji. Obrazowanie poklatkowe przeprowadzono w komórkach CHO, BPAE i HEK obciążonych barwnikami Fluo-4, Calbryte lub Fluo-8. Ca 2+ i Ba 2+ nie zmieniły fluorescencji w nienaruszonych komórkach , natomiast ich wejście po nsPEF zwiększyło fluorescencję w ciągu <1 ms.
Calbryte 520 AM
Próg dla jednego impulsu 300 ns wynosił 1,5-2 kV/cm, znacznie niższy niż >7 kV/cm dla tworzenia większych porów, które dopuszczały do wnętrza barwnika YO-PRO-1, TO-PRO-3 lub propidium. komórki. Wejście Ba 2+ spowodowało stopniowy wzrost emisji, która osiągnęła stabilny poziom w ciągu 2 min lub, przy bardziej intensywnym nsPEF, stale rosła przez co najmniej 30 min. Wejście Ca 2+ mogło wywołać uwalnianie wapnia indukowane wapniem (CICR), a następnie usunięcie Ca 2+ z cytozolu, co znacząco wpłynęło na przebieg czasowy, polaryzację, amplitudę i zależność zmiany fluorescencji od dawki. Zarówno Ca 2+ , jak i Ba 2+ okazały się być czułymi markerami nanoporacji, przy czym Ba 2+ jest bardziej niezawodny w monitorowaniu uszkodzeń membrany i ponownym uszczelnianiu.
Ocena wpływu kalikuliny A na tworzenie ognisk γH2AX/53BP1 i apoptozę w ludzkich limfocytach krwi pępowinowej
Inhibitor defosforylacji, kalikulina A ( cal A), hamuje zanikanie wywołanych promieniowaniem ognisk naprawy DNA γH2AX w ludzkich limfocytach . Jednak inne badania wykazały brak zmian w kinetyce indukcji i utraty ogniska γH2AX w napromieniowanych komórkach. Chociaż apoptoza może współgrać z kinetyką tworzenia się ognisk, nie obserwowano jej w napromieniowanych komórkach wraz z ogniskami naprawy DNA. Tak więc, aby potwierdzić wiarygodne wyjaśnienia znaczącej zmienności wyników tych badań, oceniliśmy wpływ cal A (1 i 10 nM) na ogniska naprawy DNA γH2AX/53BP1 i apoptozę napromieniowanych (1, 5, 10 i 100 cGy) ludzka pępowina _limfocyty krwi (UCBL) przy użyciu, odpowiednio, automatycznej mikroskopii fluorescencyjnej i testu aneksyny V-FITC/jodku propidyny/barwienia γH2AX.
Nie zaobserwowano wpływu cal A na γH2AX i kolokalizowane ogniska γH2AX/53BP1 indukowane niskimi dawkami (≤10 cGy) promieni γ. Co więcej, traktowanie 10 nM cal A zmniejszyło liczbę wszystkich typów ognisk naprawy DNA indukowanych przez napromieniowanie 100 cGy. 10 nM cal Leczenie indukowało apoptozę już po 2 godzinach leczenia, niezależnie od dostarczonej dawki. Apoptozę wykryto również w UCBL leczonych niższym stężeniem kali A, 1 nM, przy dłuższej inkubacji komórek, 20 i 44 godz. Nasze dane sugerują, że apoptoza wywołana przez cal A w UCBL może być przyczyną niepowodzenia cal A w celu utrzymania wywołanych promieniowaniem ognisk γH2AX. Wszystkie markery molekularne DSB użyte w tym badaniu reagowały liniowo na napromienianie małą dawką. Dlatego ich połączenie może stanowić silne narzędzie biodozymetrii do szacowania odpowiedzi na promieniowanie na niskie dawki. Ocena kolokalizowanego γH2AX /53BP1 poprawiła próg wykrywania niskich dawek.
LOKALIZOWANIE STOŻKOWYCH PRZECIĘĆ CYTOZYNY ZA POMOCĄ EKSPERYMENTÓW LASEROWYCH I OBLICZEŃ AB INITIO.
Mechanizm rozpadu wzbudzonej cytozyny S0 → S1 (Cyt) oraz efekt substytucji badano łącząc spektroskopię z chłodzeniem strumieniowym (rezonansowa jonizacja dwóch fotonów ns (R2PI) i pomiary czasu życia ps) z obliczeniami CASPT2//CASSCF dla ośmiu pochodnych. Dla Cyt i pięciu pochodnych podstawionych w N1, C5 i C6, szybka wewnętrzna konwersja zachodzi przy 250 – 1200 cm-1 powyżej pasm 00. Załamanie w widmach koreluje z obliczonymi barierami w kierunku CI „skrętu C5-C6”, co jednoznacznie ustala mechanizm zaniku przy niskich energiach drgań stanu S1.
Bariery zwiększają się wraz z podstawnikami, które stabilizują przesunięcia ładunku przy C4, C5 i C6 po wzbudzeniu (1ππ∗). Widma R2PI pochodnych 5,6-trimetylenoCyt (TMCyt) i 1-metylo-TMCyt (1M-TMCyt), rozpadających się wzdłuż współrzędnej N3 poza płaszczyzną, rozciągają się do +3500 i +4500 cm-1 .
NOWE SULFONYLOWE CHROMEN-4-ONY (CHW09) PREFERENCYJNIE ZABIJAJĄ KOMÓRKI RAKA JAMY USTNEJ WYKAZUJĄCE APOPTOZĘ, STRES OKSYDACYJNY I USZKODZENIA DNA.
Kilka funkcjonalizowanych chromonów, kluczowych składników naturalnie występujących utlenionych heterocykli, ma działanie przeciwnowotworowe, ale ich związki sulfonowe są rzadko badane. W tym badaniu zainstalowaliśmy podstawnik sulfonylowy do szkieletu chromen-4-onu i zsyntetyzowaliśmy CHW09, aby ocenić jego działanie przeciwnowotworowe jamy ustnej pod względem żywotności komórek, cyklu komórkowego, apoptozy, stresu oksydacyjnego i uszkodzeń DNA. W teście żywotności komórek CHW09 preferencyjnie zabija dwie komórki raka jamy ustnej (Ca9-22 i CAL 27), mniej wpływając na normalne komórki jamy ustnej (HGF-1). Chociaż CHW09 nie zmienia znacząco dystrybucji cyklu komórkowego, CHW09 indukuje apoptozę potwierdzoną cytometrią przepływową dla aneksyny V i metodą western blotting dla rozszczepionej polimerazy poli(ADP-rybozy) (PARP) i kaspaz 3/8/9.
Calbryte™ 520 AM |
|||
| 20650 | AAT Bioquest | 2x50 ug | 109 EUR |
Calbryte™ 520 AM |
|||
| 20651 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 334 EUR |
Calbryte™ 520 AM |
|||
| 20653 | AAT Bioquest | 1 mg | 446 EUR |
Calbryte™ 630 AM |
|||
| 20720 | AAT Bioquest | 2x50 ug | 222 EUR |
Calbryte™ 630 AM |
|||
| 20721 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 446 EUR |
Calbryte™ 630 AM |
|||
| 20722 | AAT Bioquest | 1 mg | 784 EUR |
Calbryteâ„¢ 520 AM |
|||
| 20650-2x50ug | AAT Bioquest | 2x50 ug | 109 EUR |
Calbryteâ„¢ 520 AM |
|||
| 20651-10x50ug | AAT Bioquest | 10x50 ug | 334 EUR |
Calbryteâ„¢ 520 AM |
|||
| 20653-1mg | AAT Bioquest | 1 mg | 446 EUR |
Calbryte™-520L AM |
|||
| 20640 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 367.2 EUR |
Calbryte™-520XL AM |
|||
| 20646 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 367.2 EUR |
Calbryte™ 520, potassium salt |
|||
| 20656 | AAT Bioquest | 2x50 ug | 222 EUR |
Calbryte™ 520, potassium salt |
|||
| 20658 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 446 EUR |
Calbryte™-520XL azide |
|||
| 20643 | AAT Bioquest | 1 mg | 558 EUR |
Screen Questâ„¢ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36317-1Plate | AAT Bioquest | 1 Plate | 222 EUR |
Screen Questâ„¢ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36318-10Plates | AAT Bioquest | 10 Plates | 784 EUR |
Screen Questâ„¢ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36319-100Plates | AAT Bioquest | 100 Plates | 5572 EUR |
Calbryte™ 590, potassium salt |
|||
| 20706 | AAT Bioquest | 5x50 ug | 334 EUR |
Calbryte™ 590, potassium salt |
|||
| 20707 | AAT Bioquest | 1 mg | 846 EUR |
Calbryte™ 630, potassium salt |
|||
| 20727 | AAT Bioquest | 5x50 ug | 334 EUR |
Calbryte™-520L, potassium salt |
|||
| 20642 | AAT Bioquest | 10X50 ug | 334 EUR |
Calbryteâ„¢ 590 AM |
|||
| 20700-2x50ug | AAT Bioquest | 2x50 ug | 222 EUR |
Calbryteâ„¢ 590 AM |
|||
| 20701-10x50ug | AAT Bioquest | 10x50 ug | 446 EUR |
Calbryteâ„¢ 590 AM |
|||
| 20702-1mg | AAT Bioquest | 1 mg | 671 EUR |
Calbryteâ„¢ 630 AM |
|||
| 20720-2x50ug | AAT Bioquest | 2x50 ug | 222 EUR |
Calbryteâ„¢ 630 AM |
|||
| 20721-10x50ug | AAT Bioquest | 10x50 ug | 446 EUR |
Calbryteâ„¢ 630 AM |
|||
| 20722-1mg | AAT Bioquest | 1 mg | 784 EUR |
Calbryte™-520XL, potassium salt |
|||
| 20645 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 334 EUR |
Screen Quest™ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36317 | AAT Bioquest | 1 Plate | 222 EUR |
Screen Quest™ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36318 | AAT Bioquest | 10 Plates | 784 EUR |
Screen Quest™ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36319 | AAT Bioquest | 100 Plates | 5572 EUR |
Calbryte™-520XL-Dextran |
|||
| 20648 | AAT Bioquest | 1 mg | 367.2 EUR |
Calbryteâ„¢ 520, potassium salt |
|||
| 20656-2x50ug | AAT Bioquest | 2x50 ug | 222 EUR |
Calbryteâ„¢ 520, potassium salt |
|||
| 20657-1mg | AAT Bioquest | 1 mg | 713 EUR |
Calbryteâ„¢ 520, potassium salt |
|||
| 20658-10x50ug | AAT Bioquest | 10x50 ug | 446 EUR |
Screen Questâ„¢ Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36200-1Plate | AAT Bioquest | 1 Plate | 334 EUR |
Screen Questâ„¢ Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36201-10Plates | AAT Bioquest | 10 Plates | 1070 EUR |
Screen Questâ„¢ Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36202-100Plates | AAT Bioquest | 100 Plates | 7822 EUR |
Screen Quest™ Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36200 | AAT Bioquest | 1 Plate | 334 EUR |
Screen Quest™ Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36201 | AAT Bioquest | 10 Plates | 1070 EUR |
Screen Quest™ Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit |
|||
| 36202 | AAT Bioquest | 100 Plates | 7822 EUR |
Calbryteâ„¢-520XL azide |
|||
| 20643-1mg | AAT Bioquest | 1 mg | 558 EUR |
Calbryteâ„¢ 590, potassium salt |
|||
| 20706-5x50ug | AAT Bioquest | 5x50 ug | 334 EUR |
Calbryteâ„¢ 590, potassium salt |
|||
| 20707-1mg | AAT Bioquest | 1 mg | 846 EUR |
Calbryteâ„¢ 630, potassium salt |
|||
| 20727-5x50ug | AAT Bioquest | 5x50 ug | 334 EUR |
Calbryteâ„¢-520L, potassium salt |
|||
| 20642-10X50ug | AAT Bioquest | 10X50 ug | 334 EUR |
Cal-520®, AM |
|||
| 21131 | AAT Bioquest | 1 mg | 334 EUR |
Cal-520®, AM |
|||
| 21130 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 222 EUR |
Mag-520™ AM |
|||
| 20406 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 334 EUR |
Metal Fluorâ„¢ Zn-520, AM |
|||
| 21263-1mg | AAT Bioquest | 1 mg | 222 EUR |
Metal Fluor™ Zn-520, AM |
|||
| 21263 | AAT Bioquest | 1 mg | 222 EUR |
Calcein AM |
|||
| 1755-1000 | Biovision | each | 444 EUR |
Calcein AM |
|||
| 1755-250 | Biovision | each | 392.4 EUR |
Calcein AM |
|||
| 1755-50 | Biovision | each | 157.2 EUR |
Calcein AM |
|||
| BMD0064-10mg | Abbkine | 10 mg | 2069 EUR |
Calcein AM |
|||
| BMD0064-1mg | Abbkine | 1 mg | 279 EUR |
Calcein,-AM |
|||
| E37F22002 | EnoGene | 1-mg | 600 EUR |
Calcein-AM |
|||
| GT0291-1MG | Glentham Life Sciences | 1 mg | 409.2 EUR |
Calcein-AM |
|||
| HY-D0041 | MedChemExpress | 100ug | 176.4 EUR |
Calcein-AM |
|||
| GT0291-1 | Glentham Life Sciences | 1 | 248.6 EUR |
Calcein-AM |
|||
| 06735-81 | NACALAI TESQUE | 1MG | 98 EUR |
Cal-520® maleimide |
|||
| 20610 | AAT Bioquest | 100 ug | 446 EUR |
Cal-500â„¢ AM |
|||
| 20412-10x50ug | AAT Bioquest | 10x50 ug | 222 EUR |
Cal-590â„¢ AM |
|||
| 20510-5x50ug | AAT Bioquest | 5x50 ug | 222 EUR |
Cal-590â„¢ AM |
|||
| 20511-10x50ug | AAT Bioquest | 10x50 ug | 334 EUR |
Cal-590â„¢ AM |
|||
| 20512-1mg | AAT Bioquest | 1 mg | 558 EUR |
Cal-630â„¢ AM |
|||
| 20530-5x50ug | AAT Bioquest | 5x50 ug | 334 EUR |
Cal-630â„¢ AM |
|||
| 20531-10x50ug | AAT Bioquest | 10x50 ug | 446 EUR |
Cal-630â„¢ AM |
|||
| 20532-1mg | AAT Bioquest | 1 mg | 784 EUR |
Cal-520Nâ„¢, AM |
|||
| 21146-10x50ug | AAT Bioquest | 10x50 ug | 390 EUR |
Cal-520FFâ„¢, AM |
|||
| 21142-1mg | AAT Bioquest | 1 mg | 558 EUR |
Cal-520FFâ„¢, AM |
|||
| 21143-10x50ug | AAT Bioquest | 10x50 ug | 390 EUR |
Cal-520® NHS Ester |
|||
| 20609 | AAT Bioquest | 100 ug | 446 EUR |
Cal-520®, sodium salt |
|||
| 21135 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 334 EUR |
Cal-520®, sodium salt |
|||
| 21136 | AAT Bioquest | 1 mg | 446 EUR |
Calcein Redâ„¢ AM |
|||
| 21900-1mg | AAT Bioquest | 1 mg | 222 EUR |
Cal-520®, potassium salt |
|||
| 21140 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 334 EUR |
Cal-520®, potassium salt |
|||
| 21141 | AAT Bioquest | 1 mg | 446 EUR |
Cal-520®-Biotin Conjugate |
|||
| 20605 | AAT Bioquest | 5x50 ug | 334 EUR |
Cal-520®-Biocytin Conjugate |
|||
| 20606 | AAT Bioquest | 5x50 ug | 334 EUR |
Calcein AM, (20x50ug) |
|||
| 80011-3 | Biotium | 20ST | 290.4 EUR |
Calcein AM 10x50ug |
|||
| 354216 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 339.6 EUR |
Cal-520®, AM |
|||
| 21130-10x50ug | AAT Bioquest | 10x50 ug | 222 EUR |
Cal-520®, AM |
|||
| 21131-1mg | AAT Bioquest | 1 mg | 334 EUR |
Cal-590™ AM |
|||
| 20510 | AAT Bioquest | 5x50 ug | 222 EUR |
Cal-590™ AM |
|||
| 20511 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 334 EUR |
Cal-590™ AM |
|||
| 20512 | AAT Bioquest | 1 mg | 558 EUR |
Cal-630™ AM |
|||
| 20530 | AAT Bioquest | 5x50 ug | 334 EUR |
Cal-630™ AM |
|||
| 20531 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 446 EUR |
Cal-630™ AM |
|||
| 20532 | AAT Bioquest | 1 mg | 784 EUR |
Cal-500™ AM |
|||
| 20412 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 222 EUR |
Cal-520N™, AM |
|||
| 21146 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 390 EUR |
Calcein UltraBlueâ„¢ AM |
|||
| 21908-10x50ug | AAT Bioquest | 10x50 ug | 222 EUR |
Cal-520FF™, AM |
|||
| 21142 | AAT Bioquest | 1 mg | 558 EUR |
Cal-520FF™, AM |
|||
| 21143 | AAT Bioquest | 10x50 ug | 390 EUR |
Calcein UltraGreenâ„¢ AM |
|||
| 21905-10x50ug | AAT Bioquest | 10x50 ug | 222 EUR |
ATTO-520 |
|||
| E37F520-1 | EnoGene | 1mg | 176 EUR |
Cal Greenâ„¢ 1, AM [Equivalent to Calcium Green-1, AM] |
|||
| 20501-10x50ug | AAT Bioquest | 10x50 ug | 166 EUR |
Cal Greenâ„¢ 1, AM [Equivalent to Calcium Green-1, AM] |
|||
| 20502-1mg | AAT Bioquest | 1 mg | 222 EUR |
Calcein Red™ AM |
|||
| 21900 | AAT Bioquest | 1 mg | 222 EUR |
Te ekspresje sygnalizacji apoptozy są częściowo zmniejszane przez inhibitor apoptozy (Z-VAD-FMK) lub zmiatacz wolnych rodników (N-acetylocysteina). Ponadto CHW09 indukuje stres oksydacyjny potwierdzony cytometrią przepływową dla generacji reaktywnych form tlenu (ROS) i nadtlenku mitochondrialnego (MitoSOX) oraz tłumienia potencjału błony mitochondrialnej (MMP). CHW09 indukuje również uszkodzenie DNA potwierdzone przez cytometrię przepływową pod kątem wzrostu markera dwuniciowego przerwania DNA γH2AX i oksydacyjnego markera uszkodzenia DNA 8-okso-2′-deoksyguanozyny (8-oxodG). Dlatego nasz nowo zsyntetyzowany CHW09 indukuje apoptozę, stres oksydacyjny i uszkodzenia DNA, co może prowadzić do preferencyjnego zabijania komórek raka jamy ustnej w porównaniu z normalnymi komórkami jamy ustnej.
Dodaj komentarz