Barwienie żeli i blotów błękitem Coomassie jest powszechnie stosowane do wykrywania i ilościowego oznaczania białek metodą densytometryczną. Odkryliśmy, że błękit Coomassie lub Fast Green FCF wiążą się z białkami fluorescencji w bliskiej podczerwieni. Wykorzystaliśmy tę właściwość do opracowania szybkiej i czułej metody wykrywania i oznaczania ilościowego białek w żelach i na blotach . Odpowiedź fluorescencyjna jest ilościowa dla zawartości białka od 10 ng do 20 mikrog na prążek lub plamkę. Barwienie i odbarwianie zajmuje tylko 30 minut, a metoda jest kompatybilna z późniejszą immunodetekcją.
Zmodyfikowana technika western blot w szybkim wykrywaniu oksygenazy hemowej (HO-1/HO-2) w różnych tkankach i narządach zwierząt doświadczalnych
Niniejsze badanie miało na celu określenie wszystkich warunków niezbędnych do wykrycia oksygenazy hemowej (HO) techniką western blot. Nasza zmodyfikowana metoda immunoblottingu pozwoliła na wykrycie HO po 2 godzinach elektrotransferu na błony nitrocelulozowe, co ewidentnie skróciło czas badań bez utraty czułości i swoistości w wykrywaniu HO w różnych tkankach i narządach zwierząt doświadczalnych.HO wykryto w mózgu, sercu, nerkach, wątrobie, płucach, śledzionie, jądrach i grasicy badanej myszy i szczura w ilości dostarczającej dowodów, że ta zmodyfikowana technika immunoblottingu jest wystarczająco czuła, aby wywołać istnienie tego enzymu w różne tkanki i narządy zwierząt. Podsumowując, nasza zmodyfikowana metoda Western blot pozwala na szybkie wykrywanie HO, co może być przydatne w dalszych, bardziej zaawansowanych badaniach ilościowych.
Szybka procedura Western blot ulepszona pod kątem analizy ilościowej poprzez bezpośrednie znakowanie fluorescencyjne przeciwciał pierwotnych
Procedury Western blot istnieją od dawna, a ostatnie osiągnięcia zwiększyły czułość technik luminescencyjnych, tak że zapotrzebowanie na sondy radioaktywne zostało ograniczone tylko do kilku zastosowań. Niemniej jednak większość protokołów wymaga więcej niż 6 godzin i często trwa dłużej niż jeden dzień. Większość technik wymaga drugorzędowego przeciwciała skoniugowanego z enzymem katalizującym reakcję barwną w celu wzmocnienia wykrywalnego sygnału. Jednak oba procesy, wiązanie drugorzędowego przeciwciała i katalizowana reakcja z barwnikiem, są źródłem błędów, a ta ostatnia jest niekorzystna dla sygnału, który jest liniowy w większym zakresie wykrywanego antygenu.
W celu udoskonalenia procedury najczęściej stosowanej do analizy ilościowej i wygody, zbadaliśmy zastosowanie znakowania fluorescencyjnego pierwotnych przeciwciał monoklonalnych przeciwko podjednostkom polimerazy RNA Escherichia coli (beta’, sigmaE i sigmaFecI) oraz ich zastosowanie w analizie Western blot. Uzyskaliśmy czułość (<1 ng wykrywalnego białka) porównywalną z większością technik luminescencyjnych. Dodatkowo znacznie skróciliśmy czas zabiegu do mniej niż 1 h po SDS-PAGE i przeniesieniu na membranę. Przede wszystkim uzyskaliśmy sygnał liniowy w zakresie od 30 ng do 1 mikrog białka (w zależności od wielkości białka), dzięki czemu analiza ilościowa Western blot jest łatwiejsza i bardziej wiarygodna.
AE-1465 EzFastBlot
Szybka , czuła i specyficzna metoda wykrywania wirusa karłowatości ryżu za pomocą hybrydyzacji typu Northern blot
W oparciu o stabilność dwuniciowego (ds) RNA opracowano nową, szybką, czułą i specyficzną metodę wykrywania dsRNA genomowego wirusa karłowatości ryżu (RDV) przez hybrydyzację molekularną. W przeciwieństwie do powszechnie stosowanej, standardowej analizy Northern blot, dsRNA denaturuje się na blocie w stanie unieruchomionym. Dlatego też eliminuje się ryzyko degradacji jednoniciowego (ss) RNA przez rybonukleazę (RNazę) podczas przygotowania próbki, elektroforezy i blottingu.
Ta metoda eliminuje wadę niepełnej denaturacji dsRNA w analizie Northern blot. Podsumowując, nowo opracowana metoda jest niezawodna, czuła, bardzo specyficzna i daje niskie tło. Cała procedura jest również mniej czasochłonna; można go wykonać w ciągu 2-3 dni. Nową metodę można uznać za modyfikację standardowej analizy Northern blot.
Zastosowanie testu przesiewowego Falcon – enzymatycznego testu immunosorpcyjnego ( FAST -ELISA) oraz enzymatycznego immunoelektrotransferu blot (EITB) w celu określenia częstości występowania fascioliazy u ludzi w boliwijskim Altiplano
Wspólne badanie przeprowadzone przez Szkołę Medyczną Uniwersytetu Portoryko, Centrum Kontroli Chorób, boliwijskie Ministerstwo Zdrowia oraz prywatne organizacje wolontariackie (Foster Parents Plan International i Danchurchaid) działające w Boliwii zidentyfikowało region w północno-zachodniej części Altiplano w Boliwii w pobliżu jeziora Titicaca jako siedliska największego rozpowszechnienia fascioliazy u ludzi na świecie. Do określenia częstości jego występowania zastosowano dwie techniki serologiczne (test przesiewowy Falcon test-enzyme-linked immunosorbent assay [FAST-ELISA] oraz enzym-linked immunoelectrotransfer blot [EITB]).
Sto próbek surowicy i 73 próbki kału uzyskano od Indian Aymara z Corapata w Boliwii. Poziomy absorbancji przeciwciał dla antygenów wydalania-sekrecji Fasciola hepatica porównano z wzorcami prążków EITB przy użyciu tego samego preparatu antygenowego. Dodatni wynik FAST-ELISA zdefiniowano jako wartość absorbancji większą niż średnia plus trzy odchylenia standardowe dwóch zestawów normalnych kontroli negatywnych (portorykańskich i boliwijskich).
Stosując to kryterium, 53 ze 100 przebadanych surowic dało wynik pozytywny za pomocą tej techniki. W tej grupie 19 (95%) z 20 osób, u których stwierdzono pasożyty, było również dodatnich w teście FAST-ELISA. Dodatkowe 24 osoby, u których nie otrzymano jaj F. hepatica, i 10 osób, od których nie otrzymano żadnych próbek, również uzyskały wynik pozytywny w teście FAST-ELISA. Spośród 53 osobników negatywnych na jaja F. hepatica, 29 było także negatywnych w teście FAST-ELISA. Analiza EITB surowic od potwierdzonych zakażonych osobników ujawniła co najmniej trzy prążki F. hepatica (Fh) o masach cząsteczkowych odpowiednio 12, 17 i 63 kD. (ABSTRAT OBCIĄGNIĘTY DO 250 SŁÓW).
IMMUNODIAGNOSTYKA DRAKUNKULIZY ZA POMOCĄ TESTU PRZESIEWOWEGO FALCON TEST-ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY ( FAST -ELISA) ORAZ ENZYMATYCZNEJ TECHNIKI IMMUNOELEKTROTRANSFEROWEJ (EITB) .
Test przesiewowy Falcon test-enzyme-linked immunosorbent assay (FAST-ELISA) oraz technika enzymatycznej immunoelektrotransferu blot (EITB) zostały użyte do zbadania ludzkich surowic z antygenem dorosłego robaka Dracunculus medinensis w celu oceny ich potencjalnej wartości w immunodiagnostyce drakunkuliaza. Stosowane surowice ludzkie pochodziły od pacjentów z prepatentnymi i patentnymi zakażeniami D. medinensis lub od pacjentów zakażonych innymi nicieniami (Onchocerca volvulus i Loa loa) lub przywrami (Schistosoma mansoni i S. haematobium), jak również od niezainfekowanych normalnych kontroli nigeryjskich i portorykańskich . W teście FAST-ELISA surowice od pacjentów prepatentnych i patentowych z dracunculiasis dawały najwyższe wartości absorbancji w porównaniu z normalnymi surowicami ludzkimi.
WSE-7210 EzFastBlot HMW |
|||
| 2332595 | Atto | 3unit | 313.2 EUR |
AE-1465 EzFastBlot |
|||
| 2332590 | Atto | 3unit | 352.8 EUR |
Human Adiponectin HMW( Adiponectin HMW) ELISA Kit |
|||
| QY-E05586 | Qayee Biotechnology | 96T | 433.2 EUR |
Human Kininogen (HMW) Antibody |
|||
| 20334-05011 | AssayPro | 150 ug | 260.4 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC040446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC040446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC050446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC050446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNCAP0446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNCAP0446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNCB0446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNCB0446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNCP0446-250 | Biotium | 250uL | 459.6 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNCR0446-250 | Biotium | 250uL | 459.6 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC940446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC940446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNCA0446-250 | Biotium | 250uL | 459.6 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC810446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC810446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNUB0446-100 | Biotium | 100uL | 250.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNUB0446-500 | Biotium | 500uL | 549.6 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNCH0446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNCH0446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC880446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC880446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC680446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC680446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC470446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC470446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC400446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC400446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC430446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC430446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC610446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC610446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC800446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC800446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC550446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC550446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC700446-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNC700446-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(34BE12) Antibody |
|||
| BNUM0446-50 | Biotium | 50uL | 474 EUR |
Kininogen, HMW, Human Plasma |
|||
| KINH15-N-50 | Alpha Diagnostics | 50 ug | 270 EUR |
Anti-Cytokeratin, HMW antibody |
|||
| STJ180151 | St John's Laboratory | 0.1 ml | 254.4 EUR |
Anti-Cytokeratin, HMW antibody |
|||
| STJ180152 | St John's Laboratory | 0.1 ml | 254.4 EUR |
Kininogen, HMW, Human Plasma |
|||
| 7300-100 | Biovision | each | 438 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V2940-100UG | NSJ Bioreagents | 100 ug | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V2940-20UG | NSJ Bioreagents | 20 ug | 219 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V2940IHC-7ML | NSJ Bioreagents | 7 ml | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V2940SAF-100UG | NSJ Bioreagents | 100 ug | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V2941-100UG | NSJ Bioreagents | 100 ug | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V2941-20UG | NSJ Bioreagents | 20 ug | 219 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V2941IHC-7ML | NSJ Bioreagents | 7 ml | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V2941SAF-100UG | NSJ Bioreagents | 100 ug | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V2942-100UG | NSJ Bioreagents | 100 ug | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V2942-20UG | NSJ Bioreagents | 20 ug | 219 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V2942IHC-7ML | NSJ Bioreagents | 7 ml | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V2942SAF-100UG | NSJ Bioreagents | 100 ug | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V3231-100UG | NSJ Bioreagents | 100 ug | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V3231-20UG | NSJ Bioreagents | 20 ug | 219 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V3231SAF-100UG | NSJ Bioreagents | 100 ug | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody (HMW) |
|||
| V7159-100UG | NSJ Bioreagents | 100 ug | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody (HMW) |
|||
| V7159-20UG | NSJ Bioreagents | 20 ug | 219 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody (HMW) |
|||
| V7159IHC-7ML | NSJ Bioreagents | 7 ml | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody (HMW) |
|||
| V7159SAF-100UG | NSJ Bioreagents | 100 ug | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V7200-100UG | NSJ Bioreagents | 100 ug | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V7200-20UG | NSJ Bioreagents | 20 ug | 219 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V7200IHC-7ML | NSJ Bioreagents | 7 ml | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V7200SAF-100UG | NSJ Bioreagents | 100 ug | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V7252-100UG | NSJ Bioreagents | 100 ug | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V7252-20UG | NSJ Bioreagents | 20 ug | 219 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V7252IHC-7ML | NSJ Bioreagents | 7 ml | 499 EUR |
Caldesmon / CAD Antibody HMW |
|||
| V7252SAF-100UG | NSJ Bioreagents | 100 ug | 499 EUR |
Adiponectin glycosilated, HMW Rich Protein |
|||
| 20-abx262998 | Abbexa |
|
|
Chlamydia trachomatis HMW Protein Antibody |
|||
| abx411206-02mg | Abbexa | 0.2 mg | 678 EUR |
Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody |
|||
| BNC040257-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody |
|||
| BNC040257-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(KRTH/1076) Antibody |
|||
| BNC041076-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(KRTH/1076) Antibody |
|||
| BNC041076-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody |
|||
| BNC050257-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody |
|||
| BNC050257-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody |
|||
| BNCAP0257-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody |
|||
| BNCAP0257-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(KRTH/1076) Antibody |
|||
| BNCAP1076-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(KRTH/1076) Antibody |
|||
| BNCAP1076-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody |
|||
| BNCB0257-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody |
|||
| BNCB0257-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(KRTH/1076) Antibody |
|||
| BNCB1076-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(KRTH/1076) Antibody |
|||
| BNCB1076-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody |
|||
| BNCP0257-250 | Biotium | 250uL | 459.6 EUR |
Cytokeratin HMW(KRTH/1076) Antibody |
|||
| BNCP1076-250 | Biotium | 250uL | 459.6 EUR |
Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody |
|||
| BNCR0257-250 | Biotium | 250uL | 459.6 EUR |
Cytokeratin HMW(KRTH/1076) Antibody |
|||
| BNCR1076-250 | Biotium | 250uL | 459.6 EUR |
Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody |
|||
| BNC940257-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody |
|||
| BNC940257-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(KRTH/1076) Antibody |
|||
| BNC941076-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Cytokeratin HMW(KRTH/1076) Antibody |
|||
| BNC941076-500 | Biotium | 500uL | 652.8 EUR |
Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody |
|||
| BNCA0257-250 | Biotium | 250uL | 459.6 EUR |
Cytokeratin HMW(KRTH/1076) Antibody |
|||
| BNCA1076-250 | Biotium | 250uL | 459.6 EUR |
Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody |
|||
| BNC810257-100 | Biotium | 100uL | 238.8 EUR |
Największą reaktywność krzyżową zaobserwowano z surowicami z onchocerkozy; nie zaobserwowano reaktywności krzyżowej z surowicami osobników z loiazą lub schistosomatozą mansoni lub hematobią. Według EITB surowice od pacjentów z drakulizą specyficznie rozpoznawały białko 16 kDa (Dm 16), a przeciwciała przeciwko Dm 16 zniknęły 2 miesiące po ekstrakcji robaka. Rozpoznanie Dm 16 nastąpiło od późnego etapu prepatentnego. Białko 17 kDa (Dm 17) było również rozpoznawane przez surowice od dracunculiasis, ale przeciwciała przeciwko Dm 17 znikały wolniej i były obecne 1 rok po wyzdrowieniu. Antygeny D. medinensis 16 kDa i 17 kDa mogą być przydatne w immunodiagnostyce drakunkuliozy.
Dodaj komentarz